Agitha- a Princesa dos Insetos

Agitha é um personagem do Zelda - Twilight Princess, ela se auto proclama a princesa dos insetos, mas na verdade ela não faz parte de nenhuma familia real. Ela vive em seu "castelo" na parte oeste da Cidade do Castelo de Hyrule. Ela coleciona Golden Bugs (Insetos Dourados). Segundo o Nintendo's Guide book ela tem dez anos de idade.

Teorias dizem que Agitha pode ter descendencia de Kokiris, isso porque ela é uma criança que vive sem um adulto, tem uma arvore dentro de casa, que pode ser uma referencia a Kokiri Forets e sua aparencia geral, tais como seu cabelo loiro e orelhas, que lembram muito um Kokiri.

Link Lobo

Link lobo é a forma que Link toma ao entrar no Twilight Realm. Nesta forma ele não pode usar suas armas ou inventário, ao invés disso usa seus instintos animais. Link Lobo tem a habilidade de usar seus sentidos para ver espiritos no Twilight Realm, podendo então descobrir coisas e segredos. Ele também tem a habilidade de cavar pequenas passagens, o que permite-o chegar em locais secretos e outras areas inacessiveis, quando está na forma de lobo ele também pode conversar com animais.

Enquanto ele está na forma de lobo, Midna acompanha-o montada nas suas costas. Quando Link consegue a Master Sword, ele também ganha o Shadow Crystal que permite a ele se transformar em humano ou lobo quase sempre que quiser.

Ganondorf - O Senhor das Trevas

Ganondorf é o Rei dos Gerudos

e é o vilão principal de Twilight Princess.

Em uma cutscene vemos Ganondorf 

ser sentenciado a morte pelos Sábios,

mas por ser um dos escolhidos pelos deuses 

isso nao foi possivel, ao invés disso

ele se solta e mata o Sábio da Agua,

os outros sábios preocupados, usam o Mirror of Twilight

para manda-lo para o Twilight Realm

Lá ele influencia Zant a tomar trono de Midna

e da a ele poder para isso, em troca de sair do seu banimento.

Rusl - O Mentor de Link

Rusl age como mentor de Link, faz parte do grupo que tenta salvar Hyrule. Rusl é o marido de Uli e pai de Colin. Rusl e Uli estão para ter um segundo filho. No começo do jogo, Rusl confia a Link a tarefa de entregar um presente no castelo de Hyrule. Rusl tem grande conhecimento na arte do Swordplay, e é ele quem dá a Link sua primeira espada. Ele ajuda Link a encontrar as partes do Mirror of Twilight. Rusl aparece no lado externo do Florest Temple e entrega a Link uma galinha dourada, que permite a que ele chegue ao Templo do Tempo na forma humana.

Zant

Tem o plano de governar o mundo, fundindo-o com o Twilight Realm usando um exército de Shadow Beasts.

Recebe a ajuda de um suposto deus, que depois se revela ser um conhecido vilão da série.

Zant usurpa o trono do Twilight Realm e se proclama Rei.

Midna - A Princesa do Reino do Crepusculo

Ela é uma das personagens principais do Jogo.
É a Princesa do Twilight Realm, sua forma foi mudada por Zant
como punição por nao se juntar a ele
Ocupa o lugar que seria de uma Fada, porém o papel dela vai bem além.
Ela é da raça Twili, e na verdade ela é quem escolhe Link para ajuda-la.
Sua missão principal é Salvar o Twilight Realm das mãos de Zant.

Ordon Link

 O personagem principal da série, vive na pequena vila de Ordon.

Teria de levar um presente para o Rei, mais seus amigos são raptados.
Na tentativa de ajuda-los acaba indo para o Twilight Realm, onde é transformado em lobo, e aprisionado em um Castelo, mas foge com ajuda de midna

A partir daí sua missão é salvar não só seus amigos, mas sim o mundo.